کورم سینسنگ روکنے والے: CRISPR مدافعتی نظام کی بنیاد پر Pseudomonas aeruginosa کے phage مزاحمت کے ارتقا میں تعاون کریں

جراثیم کش مزاحمت کلینیکل علاج میں ایک اہم مسئلہ ہے ، اور Pseudomonas aeruginosa سرجری کے بعد فیج وائرس انفیکشن کا ممکنہ ہدف ہے۔ لیبارٹری کے مطالعے سے پتہ چلا ہے کہ سیوڈوموناس ایروگینوسا CRISPR-Cas انکولی مدافعتی نظام جین استعمال کرتا ہے تاکہ بیکٹیریوفیجز اور دیگر پرجیوی ڈی این اے سے مدافعتی میموری پیدا کرے ، ایک پیچیدہ قدرتی ماحول میں تیزی سے ارتقاء پائے اور بیکٹیریافیج مزاحمت پیدا کرے ، اس طرح فیج تھراپی کے استعمال کو محدود کیا جائے۔ حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ کورم سینسنگ (QS) سسٹم سیڈوموناس ایروگینوسا کے CRISPR-Cas مدافعتی نظام کے اظہار کو منظم کرتا ہے۔ Pseudomonas aeruginosa کا QS سسٹم LasIR اور RhlIR پر مشتمل ہے ، جو کہ CRISPR-Cas مدافعتی نظام ، وائرلیس اور بائیوفلم جیسے جسمانی افعال کے اظہار کو کنٹرول کر سکتا ہے۔ LasIR 3-oxo-C12-homoserine lactone (3OC12-HSL) سگنلنگ مالیکیول کے اظہار کو منظم کرتا ہے ، RhlIR C4-homoserine lactone (C4-HSL) سگنلنگ مالیکیول کے اظہار کو کنٹرول کرتا ہے۔ لہذا ، محققین قیاس کرتے ہیں کہ میڈیکل کورم سینسنگ انابیٹرز (کورم سینسنگ انابیٹرز ، کیو ایس آئی) کا استعمال سی آر آئی ایس پی آر امیون لوکی کی بنیاد پر سیوڈوموناس ایروگینوسا کے ارتقاء کو محدود کر سکتا ہے اور انہیں کلینیکل ریسرچ میں لاگو کر سکتا ہے۔

اس مطالعے میں ، محققین نے سیوڈوموناس ایروگینوسا CRISPR پر مبنی فیج (DMS3vir) مزاحمت پر اس کے اثر کا مطالعہ کرنے کے لیے بیکلین کو QSI کے طور پر استعمال کیا۔ اسی وقت ، Pseudomonas aeruginosa کا QS جین اتپریورتی تناؤ بنایا گیا تاکہ اتپریورتن تناؤ 3OC12-HSL اور C4-HSL پیدا نہ کر سکے۔ 3OC12-HSL اور C4-HSL کو ضم کر کے ، CRISPR-Cas مدافعتی نظام پر مبنی Pseudomonas aeruginosa کی فیز مزاحمت کے ارتقا کا تجزیہ کیا گیا۔ Pseudomonas aeruginosa کے phage adsorption اور کلیئرنس کی صلاحیتوں کا مطالعہ کرنے کا طریقہ کار۔ اس کے علاوہ ، فیز حساس بیکٹیریا (CRISPR-KO) اور Phage مزاحم بیکٹیریا (CRISPR-KO سرفیس اتپریورتی) QS سسٹم بلاک ہونے کے بعد Pheudomonas aeruginosa کی فیج سے مقابلہ کرنے کی صلاحیت میں تبدیلیوں کا مطالعہ کرنے کے لیے کنٹرول کے طور پر استعمال ہوتے تھے۔

کنٹرول گروپ میں ، Pseudomonas aeruginosa کی جنگلی قسم کے فیج مزاحمت میں کمی آئی کیونکہ فیز کی کثافت میں اضافہ ہوا۔ تاہم ، متوقع نتائج کے برعکس کہ QSI Pseudomonas aeruginosa کی مزاحمت کو کم کر دے گا ، جب 100μM baicalein شامل کیا گیا تو Pseudomonas aeruginosa کی phage کے خلاف مزاحمت بڑھ گئی۔ جب فیج سے حساس بیکٹیریا 104pfu یا 107pfu phage کو متاثر کرتے ہیں تو ان کی مزاحمت میں نمایاں اضافہ ہوتا ہے۔ مزید برآں ، تحقیق کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ جب Pseudomonas aeruginosa کا QS نظام روکا جاتا ہے تو ، فیج کے لیے میزبان کو متاثر کرنا مشکل ہوتا ہے۔ جب QS سسٹم کو روکا گیا تو 106 pfu phage کے ماحول میں Pseudomonas aeruginosa کی متعلقہ فٹنس میں نمایاں اضافہ ہوا۔ اس مطالعے میں ، کیو ایس آئی نے بیکٹیریل قسم IV فیمبریا کے اظہار کو متاثر کیا ، جس کی وجہ سے بیکٹیریل ثقافتوں کے لیزس میں تاخیر ہوتی ہے ، فیج جذب ہونے کی شرح کم ہوتی ہے ، اور بیکٹیریل سی آر آئی ایس پی آر مدافعتی نظام میں فیج مزاحمت کے ارتقاء کو آسان بناتا ہے۔ لہذا ، QSI Pseudomonas aeruginosa پر متعدی پیلی قسم کے فیج کے مخصوص علاج معالجے کو کم کرتا ہے۔