LRRK2-IN-1 CAS 1234480-84-2 حیاتیاتی سرگرمی

وٹرو میں

وائلڈ قسم اور G2019S نقل و حمل کے نتیجے میں 2.5 گنا زیادہ TR-FRET سگنل ملتا ہے جس کے ذریعہ روکا جاسکتا ہے۔LRRK2-IN-1ایک خوراک پر منحصر انداز میں بالترتیب 0.08 µM اور 0.03 µM کی IC50 قدروں کے ساتھ [1]۔ ڈی آر ایل کے 2 کی روک تھام کے لئے LRRK2-IN-1 کے پاس 45 NM کا ایک IC50 ہے اور جب AURKB ، CHEK2 ، MKNK2 ، MYLK ، NUAK1 ، اور PLK1 کے لئے بائیو کیمیکل اسیسس میں جانچ پڑتال کی جاتی ہے تو اس میں 1 µM سے زیادہ کے IC50 کی نمائش ہوتی ہے۔ LRRK2-IN-1 میں 160 NM کے EC50 کے ساتھ MAPK7 کو روکنے کی تصدیق کی گئی ہے۔ LRRK2-IN-1 Ser910 اور Ser935 فاسفوریلیشن کی خوراک پر منحصر پابندی کی حوصلہ افزائی کرتا ہے اور اس کے ساتھ جنگلی قسم LRRK2 اور LRRK2 [G2019S] دونوں کو استحکام سے HEK293 خلیوں میں منتقل کیا جاتا ہے [2]۔ LRRK2-IN-1 ہیپ جی 2 خلیوں میں 49.3 µM کے آئی سی 50 کے ساتھ اعتدال پسند سائٹوٹوکسک ہے۔ LRRK2-IN-1 بالترتیب 15.6 اور 3.9 µM پر S9 کی موجودگی اور غیر موجودگی میں جینٹوکسائٹی کو ظاہر کرتا ہے [3]۔ LRRK2-IN-1 پھیلاؤ ، ہجرت کو روکتا ہے ، اور HC116 اور AsPC-1 خلیات [4] کے اپوپٹوسس کی علامتوں کے ساتھ سیل موت کی حوصلہ افزائی کرتا ہے [4] ..

جاندار کےاندر

LRRK2-IN-1 (100 مگرا / کلوگرام ، ip) چوہوں کے گردے میں LRRK2 کی ڈیفاسفوریلیشن کو آمادہ کرتا ہے [2]۔ LRRK2-IN-1 (100 مگرا / کلوگرام) کے پیریٹیمورل انجکشن کے نتیجے میں ٹیومر کے حجم اور AsPC-1 ٹیومر xenografts [4] کے وزن میں نمایاں کمی واقع ہوتی ہے۔

کناسے پرے

فعال جی ایس ٹی- LRRK2 (1326-2527) ، جی ایس ٹی- LRRK2 [G2019S] (1326-2527) ، جی ایس ٹی- LRRK2 [A2016T] (1326-2527) اور جی ایس ٹی- LRRK2 [A2016T + G2019S] (1326-2527) ) ینجائم مناسب سی ڈی این اے تعمیرات کی عارضی منتقلی کے بعد ، ایچ کے 293 سیل لیزیٹ 36 ہ سے گلوٹوتھین سیفروز سے پاک ہے۔ پیپٹائڈ کناس اسیس ، جو نقل میں انجام دیئے جاتے ہیں ، ان میں 40 mL کی کل مقدار میں 0.5 µg LRRK2 کناس (جو تقریبا 10٪ طہارت پر حتمی حراستی 8 NM دیتا ہے) میں 50 ایم ایم ٹرس / ایچ سی ایل ، پییچ 7.5 ، 0.1 ایم ایم میں ترتیب دیا گیا ہے۔ ای جی ٹی اے ، 10 ایم ایم ایم جی سی ایل 2 ، 20 µ ایم نیکٹائڈ ، 0.1 µM [γ-32P] اے ٹی پی (500 سی پی ایم / پی ایم او ایل) اور ڈی ایم ایس او میں تحلیل ہونے والے روکنے والے کی نشاندہی شدہ حراستی۔ 30 ° C پر 15 منٹ تک انکیوبیشن کے بعد ، ردعمل کو P81 فاسفیلولوز کاغذ اور 35 ملی میٹر فاسفورک ایسڈ میں وسرجن میں 35 µL رد mixعمل ملا کر دیکھتے ہیں۔ نمونے بڑے پیمانے پر دھوئے جاتے ہیں اور [γ-32P] اے ٹی پی کو نکٹائڈ میں شامل کرنے کی اطلاع سیرنکوف کی گنتی کے ذریعہ دی گئی ہے۔ آئی سی 50 کی اقدار کا حساب گراف پیڈ پرزم کے ذریعہ غیر لکیری رجعت تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے کیا جاتا ہے۔

سیل پرے

خلیات (فی اچھی طرح 104 خلیات) کو تین کڑیوں میں ایک 96 اچھی ٹشو کلچر پلیٹ میں ملایا جاتا ہے۔ خلیات 0 ، 0.31 ، 0.63 ، 1 ، 2 ، اور 5 ، 10 ، اور 20 μM پر بطور ایک گاڑی DMSO کے ساتھ LRRK2-IN-1 کی موجودگی میں مہذب ہیں۔ 48 ک پوسٹ پوسٹ ٹریٹمنٹ ، TACS MTT ریجنٹ کا 10 ntL ہر کنویں میں شامل کیا جاتا ہے اور خلیوں میں سیاہ کرسٹل لپٹی نمودار ہونے تک خلیوں کو 37 ° C پر انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ ڈی ایم ایس او میں 266 ایم ایم این ایچ 4 او ایچ کے 100 μL پھر کنوؤں میں شامل کیا جاتا ہے اور 1 منٹ کے لئے کم رفتار سے پلیٹ شیکر پر رکھ دیا جاتا ہے۔ لرز اٹھنے کے بعد ، پلیٹ کو روشنی سے محفوظ 10 منٹ تک انکوبیٹ کرنے کی اجازت ہے اور مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ہر کنویں کے لئے OD550 پڑھا جاتا ہے۔ نتائج کی اوسط اور حساب DMO (گاڑی) کنٹرول of {23}} / - وسط کی معیاری غلطی کی فیصد کے طور پر کیا جاتا ہے۔

جانوروں کا ایڈمن

LRRK2-IN-1کیپٹیسول میں تحلیل ہوتا ہے اور 100 ملی گرام / کلوگرام کی خوراک میں جنگلی قسم کے مرد C57BL / 6 چوہوں میں انٹراپرائٹونیئل انجیکشن کے ذریعہ ان کا انتظام کیا جاتا ہے۔ کنٹرول چوہوں کو کیپٹیسول کے مساوی حجم کے ساتھ ٹیکہ لگایا جاتا ہے۔ 1 اور 2 H ٹائم پوائنٹس پر ، چوہوں کو گریوا کی سندچیوتی اور گردے اور دماغ کے بافتوں سے تیزی سے بے دخل اور مائع نائٹروجن میں سنیپ منجمد کر کے بجھایا جاتا ہے۔

حوالہ جات

[1] ہرمسن ایس بی ، یٹ رحمہ اللہ۔ LRRK2 Ser935 Phosphorylation.PLoS One کے لئے ایک اعلی تھروپٹ TR-FRET سیلولر پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے ناول LRRK2 روکنے والوں کے لئے اسکریننگ۔ 2012 7 7 (8): e43580۔ ایبب 2012 اگست 28۔

[2]۔ ڈینگ ، ژیانمنگ۔ ، وغیرہ۔ پارکنسن جی جی # 39 disease کی بیماری کناس LRRK2 کے انتخابی روکنےوال کی علامت۔ فطرت کیمیکل حیاتیات (2011) ، 7 (4) ، 203-205۔

[3]۔ کوشیبو کے ، وغیرہ۔ پارکنسن جی جی # 39 D کی بیماری کے فارماسولوجیکل اسٹڈیز کے ل L LRRK2-IN-1 کا متبادل۔ دواسازی 2015 96 96 (5-6): 240-7.

[4]۔ ویجنٹ این ، یٹ اللہ۔ چھوٹے انو kinase inhibitor LRRK2-IN-1 کولورکٹل اور لبلبے کے کینسر کے خلاف مضبوط سرگرمی کا مظاہرہ کرتا ہے۔ 2014 مئی 6 13 13: 103